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Piuma生物納米壓痕儀在軟骨硬度在微觀和宏觀尺度上的空間變化的應用

 更新時間:2022-08-22 點擊量:1603
目的:關節(jié)軟骨作為承重表面,其特征在于非均質(zhì)性和多帶狀組織。頂層是關節(jié)軟骨的第一個受累區(qū),這是由于骨關節(jié)炎等退行性疾病的結(jié)果。壓痕實驗能夠確定軟骨表層的位點依賴性(粘性)彈性特性。我們已經(jīng)建立了一種可重復的微壓痕方法來測量大鼠膝關節(jié)軟骨的表層剛度,并確定一個膝關節(jié)隔室內(nèi),內(nèi)側(cè)和側(cè)隔室之間,一只動物的左膝蓋和右膝蓋之間以及動物之間的空間變化。
方法:使用帶有球形壓頭的位移控制納米壓頭機(荷蘭Piuma)(Optics11)在大鼠脛骨樣品(Harlan,Wistar,男性,12周齡)上獲得基于壓痕的力 - 位移曲線。將樣品附著在底物上,并用補充蛋白酶抑制劑的PBS溶液覆蓋(德國羅氏)。應用了不同的探頭尺寸(范圍50-150微米)和壓痕深度(范圍4-12微米),并在900×900μm的區(qū)域內(nèi)測試了多個壓痕的再現(xiàn)性(圖1)。軟骨的有效彈性模量是基于Oliver-Pharr理論計算的,用于具有球形壓頭的壓痕。
結(jié)果:實驗的再現(xiàn)性,在同一位置的不同時間點應用單個壓痕,僅發(fā)現(xiàn)5%的變化。然而,在900x900μm區(qū)域內(nèi)軟骨硬度的空間變化是巨大的,高達20倍的變化(圖2)。因此,需要至少一系列144個壓痕(12×12網(wǎng)格,點與點之間的距離為82μm)才能在該區(qū)域上找到可重現(xiàn)的剛度圖,并為該區(qū)域提供可重現(xiàn)的平均值。對于所有動物,膝蓋的側(cè)隔室比內(nèi)側(cè)隔室硬得多(表1,P值<0.01)。此外,我們還發(fā)現(xiàn)動物之間的有效模量存在相當大的差異,并且每種動物內(nèi)左右膝關節(jié)模量之間的變異性甚至更高(表2,P值<0.001)。
結(jié)論:大鼠膝關節(jié)軟骨組織表層的有效彈性模量可重復測量。由于存在廣泛的空間變化,因此需要大量的壓痕才能獲得區(qū)域的適當剛度圖。內(nèi)側(cè)和外側(cè)隔室之間的巨大變化可能表明該大鼠菌株在關節(jié)的內(nèi)側(cè)和外側(cè)的特定負荷模式可能與解剖結(jié)構(gòu)有關。令人驚訝的是,左膝和右膝的軟骨硬度之間存在很大差異,這表明對一條腿的負荷偏好,也可能與被安置在相對較小的籠子中的大鼠的相對久坐的情況有關,沒有太多的活動選擇。
剛度(平均±性運升)(兆帕)示例 1示例 2示例 3
中間字母2.8±2.14.8±2.70.3±0.1
側(cè)面的3.5±1.66.1±2.62.8±0.9
剛度(平均±性運升)(兆帕)示例 1示例 2示例 3示例 4
4.8±1.96.7±3.15.6±4.90.3±0.1
2.7±2.33.8±3.32.1±1.75.0±2.8

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